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簡(jiǎn)要描述:WSU-HN30人口腔鱗狀細(xì)胞 上海復(fù)祥生物提供 ATCC 細(xì)胞|細(xì)胞系|細(xì)胞株|腫瘤細(xì)胞|細(xì)胞|貼壁細(xì)胞|懸浮細(xì)胞|,細(xì)胞庫(kù)管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻(xiàn)和培養(yǎng)條件,網(wǎng)站上有細(xì)胞照片,歡迎各位老師咨詢!
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WSU-HN30人口腔鱗狀細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
細(xì)胞英文名稱 | WSU-HN30 | 細(xì)胞中文名稱 | 人口腔鱗狀細(xì)胞 |
形態(tài)特性 | 上皮樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
培養(yǎng)體系 | DMEM+10%FBS | ||
傳代方法 | 1:2--1:4傳代 | 傳代情況 | 2~3天1次 |
凍存條件 | 細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液 | ||
備注 | 收集瓶中培養(yǎng)基,留作過(guò)渡培養(yǎng)。 |
二、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)?/span>辦法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml*培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基)
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過(guò)80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
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